鐵嶺市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀標(biāo)準(zhǔn)
發(fā)布時(shí)間：2022-05-29 01:38:43
鐵嶺市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀標(biāo)準(zhǔn)
分子診斷是當(dāng)代醫(yī)學(xué)發(fā)展的重要前沿領(lǐng)域之一，其核心技術(shù)是基因診斷，常規(guī)技術(shù)包括：（1）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）；（2）DNA測(cè)序（DNA sequencing）；（3）熒光原位雜交技術(shù)（FISH）；（4）DNA印跡技術(shù)（ DNA blotting ）；（5）單核苷酸多態(tài)性（SNP）；（6）連接酶鏈反應(yīng)（LCR）；（7）基因芯片技術(shù)（gene chip）。
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分子診斷主要是應(yīng)用分子生物學(xué)方法檢測(cè)生物體內(nèi)遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)或表達(dá)水平的變化而做出診斷的技術(shù)。由于分子診斷可以從基因?qū)哟芜M(jìn)行檢測(cè)，因此檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性的優(yōu)勢(shì)較為明顯，可在感染初期識(shí)別病毒或者提早確認(rèn)基因缺陷，從而提供個(gè)性化的醫(yī)療診斷服務(wù)，主要應(yīng)用于遺傳病、傳染性疾病、腫瘤等疾病的檢測(cè)與診斷。分子診斷主要包括 核酸診斷 和 生物芯片技術(shù) 。
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動(dòng)物疫病包括動(dòng)物傳染病、寄生蟲(chóng)病。動(dòng)物傳染病，即由病原體侵入動(dòng)物體內(nèi)，使動(dòng)物產(chǎn)生具有一定潛伏期和臨床癥狀并具有傳播性 的動(dòng)物疫病，如口蹄疫、雞瘟、牛肺疫、炭疽、布魯氏菌病、狂 犬病等。動(dòng)物寄生蟲(chóng)病，即由寄生蟲(chóng)寄生在動(dòng)物體內(nèi)或體表引起 的疾病，如豬囊蟲(chóng)病、旋毛蟲(chóng)病、鉤端螺旋體病、血吸蟲(chóng)病、疥瞞等。根據(jù)動(dòng)物疫病對(duì)養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)和人體健康的危害程度，我國(guó)還 將動(dòng)物疫病分為下列三類：對(duì)人畜危害嚴(yán)重、需要采取緊急、嚴(yán) 厲的強(qiáng)制預(yù)防、控制、撲滅措施的為一類疫??；可造成重大經(jīng)濟(jì) 損失、需要采取嚴(yán)格控制、撲滅措施，防止疫情擴(kuò)散的為二類疫 ?。怀Ｒ?jiàn)多發(fā)、可能造成重大經(jīng)濟(jì)損失、需要控制和凈化的為三 類疫病。
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常規(guī)普通PCR常見(jiàn)問(wèn)題：1. 優(yōu)化反應(yīng)條件，梯度摸索退火溫度，延長(zhǎng)退火延伸時(shí)間，增加反應(yīng)循環(huán)數(shù)（30-45區(qū)間為宜）。2. 對(duì)核酸模板進(jìn)行純化，或使用商業(yè)化核酸提取試劑盒進(jìn)行提取，增加核酸模板的上樣量。3. 優(yōu)化反應(yīng)體系（預(yù)混體系除外），改變檢測(cè)體系中的Mg2+濃度及dNTPs用量，更換體系中Buffer。4. 重新設(shè)計(jì)引物，避免引物二聚體和鏈內(nèi)二級(jí)結(jié)構(gòu)，在一次稀釋引物后可分裝成多支小管，減少反復(fù)凍融次數(shù)。
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動(dòng)物防疫動(dòng)物疫病的預(yù)防、控制、撲滅及動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品的檢疫。狹義的動(dòng)物防疫，是為了預(yù)防某種動(dòng)物疫病，對(duì)所飼養(yǎng)的動(dòng)物進(jìn)行針對(duì)性地接種疫苗后，產(chǎn)生一種明顯針對(duì)該種疫病的免疫力，也就是通過(guò)打預(yù)防針而預(yù)防動(dòng)物疫病的發(fā)生。疫病預(yù)防指采取一切手段將某種傳染病排除在一個(gè)未受感染動(dòng)物群之外的防疫措施。通過(guò)多種隔離設(shè)施和檢疫措施阻止某種傳染病進(jìn)入一個(gè)尚未被污染的地區(qū)；或通過(guò)免疫接種、藥物預(yù)防和環(huán)境控制等措施，保護(hù)動(dòng)物免遭疫病危害。
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熱啟動(dòng)通過(guò)抑 制一種基本成分延遲DNA合成，直到PCR 儀達(dá)到變性溫度。延緩加入Taq DNA 聚合酶的手工熱啟動(dòng)方法十分煩瑣，尤其是對(duì)高通量應(yīng)用。其他熱啟動(dòng)方法使用蠟防護(hù)層將一種基本成分(鎂離子、酶、模板、緩沖液等) 隔離開(kāi)。在熱循環(huán)時(shí)，蠟熔化把各種成分釋放出來(lái)并混在一起。蠟防護(hù)層法同樣比較煩瑣，易于污染，不適用于高通量應(yīng)用。